10×RealBlot 快速濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜液
10×RealBlot Rapid Tank
Transfer buffer Ver.740865
● 產(chǎn)品組成：
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貨號
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名稱
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規(guī)格
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RT5020
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10×RealBlo快速濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜液
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500 ml
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說明書
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一份
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● 產(chǎn)品簡介：
10×RealBlo快速濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜液使用獨特配方，能高效快速地將蛋白轉(zhuǎn)移到印跡膜（PVDF或硝纖膜）上。使用濕轉(zhuǎn)法（Tank blot）能在15-40分鐘內(nèi)完成轉(zhuǎn)膜過程。
產(chǎn)品特點：
快速和環(huán)保：快速轉(zhuǎn)膜液不使用甲醇，減輕了對實驗者和環(huán)境的傷害。
兼容性好：快速轉(zhuǎn)膜液能兼容Laemmli膠（Tris-甘氨酸膠），Bis-Tris膠等多種凝膠。
轉(zhuǎn)移效率高：快速轉(zhuǎn)膜液對分子量跨度較大的蛋白也有很好的轉(zhuǎn)移效率，有效解決了大小蛋白不能在同一張膜上同時轉(zhuǎn)移的問題。
● 貯存、效期及運輸：
4-8℃貯存；有效期一年；常溫運輸。
● 使用說明：
轉(zhuǎn)膜前的準備：
裁好的普通濾紙或Whatman3MM濾紙；裁好的轉(zhuǎn)印膜；足夠的1×快速轉(zhuǎn)膜液；無水甲醇（處理PVDF膜用）
一 濕轉(zhuǎn)法（Tank blot）：
1 按照下表配制1×快速轉(zhuǎn)膜液
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加入順序
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原料
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1×快速轉(zhuǎn)膜液配制量 1000 ml
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1
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10×快速轉(zhuǎn)膜液
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100 ml
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2
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超純水
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700 ml
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3
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無水乙醇
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200 ml
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2 將濾紙和海綿浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中，完全浸濕，平衡5分鐘。
3 PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕30秒，隨后浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中，完全浸濕，平衡5分鐘；NC膜無需處理，直接浸泡在轉(zhuǎn)膜緩沖液中。
4 將凝膠在超純水中浸泡漂洗2分鐘，去除膠表面的SDS；隨后將凝膠浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中。
注意：水中漂洗時間不能超過2分鐘，否則可能會影響大分子量蛋白的轉(zhuǎn)移。
5 按照以下順序做好轉(zhuǎn)印三明治結(jié)構(gòu)：
1 負極（陰極）
2 一塊海綿
3 濾紙（3張，每張厚度0.8mm）
4 凝膠
5 轉(zhuǎn)印膜
6濾紙（3張，每張厚度0.8mm）
7 一塊海綿（根據(jù)三明治的厚度選擇是否使用）
8 正極（陽極）
注意： = 1 \* GB3 ① 要徹底清除三明治結(jié)構(gòu)中的氣泡，適當補加1×快速轉(zhuǎn)膜液保持三明治結(jié)構(gòu)濕潤。
= 2 \* GB3 ② 三明治結(jié)構(gòu)的制作不能太緊，也不能太松。太緊和太松都會影響轉(zhuǎn)印效果。如果太緊的話，可以去除陽極一側(cè)的海綿。
6 將三明治結(jié)構(gòu)放于轉(zhuǎn)移槽中，轉(zhuǎn)印槽中灌滿1×快速轉(zhuǎn)膜液。
7 濕轉(zhuǎn)推薦使用恒流轉(zhuǎn)移：
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凝膠厚度
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恒流
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分子量大小
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轉(zhuǎn)膜時間
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電壓變化
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1.0 mm
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300 mA
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20 kD以下
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20 min
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50-65 V
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20- 150 kD
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40 min
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150 kD 以上
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60 min以上
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400 mA
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20 kD以下
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15 min
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20- 150 kD
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30 min
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150 kD 以上
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40 min以上
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注：如果凝膠厚度1.5 mm，延長轉(zhuǎn)膜時間15 min
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8 配好的1×快速轉(zhuǎn)膜液不建議重復(fù)使用，以免影響轉(zhuǎn)膜效果。
二 問題解決：
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問題
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可能原因
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解決方法
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轉(zhuǎn)膜不充分
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濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移槽鉑金絲有鹽沉積
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徹底用超純水清洗轉(zhuǎn)移槽
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轉(zhuǎn)移膜，濾紙，凝膠沒有在1×轉(zhuǎn)移緩沖液中徹底平衡
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轉(zhuǎn)移膜，濾紙，凝膠要在1×快速轉(zhuǎn)膜液中平衡5分鐘，震蕩平衡更好
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PVDF膜沒有用甲醇預(yù)處理
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PVDF膜要用甲醇徹底潤濕，然后在1×快速轉(zhuǎn)膜緩沖液中平衡5分鐘
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轉(zhuǎn)膜時間不充分
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適當延長轉(zhuǎn)膜時間
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不連續(xù)的轉(zhuǎn)膜
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凝膠和膜之間有氣泡
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轉(zhuǎn)膜三明治做好后，用滾軸把凝膠和膜之間的氣泡趕走
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PVDF膜沒有用甲醇預(yù)處理
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PVDF膜要用甲醇潤濕，然后在1×快速轉(zhuǎn)膜緩沖液中平衡5分鐘
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轉(zhuǎn)膜設(shè)備不工作
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電泳電源不配套
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電泳電源要符合以下參數(shù)：300W，5-300V，0.01-3A
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實驗示例：
